汕尾痰检实验室

痰检实验室操作规程

一、检查程序

（一）痰标本收集：在三个痰标本盒上注明病人的姓名、编号、检查日期和容器序号。病人shou次留痰前应指导病人，留取“即时痰”、“夜间痰”、“晨痰”合格的痰标本，对所送不合格痰标本除常规检查外，应要求患者重新送检，合格的痰标本包括干酪痰、血痰、粘液痰。唾液或口水用于病人确诊时为不合格痰标本，标本量一般在3～5 ml。

（二）痰涂片制作：

1、检查前对新的玻片用95%的乙醇擦拭脱脂，经干燥、清洁、检查无油污、无划痕后作为合格的玻片备用。在已经准备的痰玻片背面左端的1/3处注明编号，挑取痰标本中可疑部分约0.05～0.1 ml，于玻片正面右侧2/3处，均匀涂抹成10×20 mm的卵圆形痰膜。

2、痰膜朝上静置自然干燥后(一般约需要30分钟)进行染色镜检。当气温低，痰膜不易干燥时，严禁将玻片直接在火焰上烘拷，以防产生气溶胶或痰膜脱落。一张载玻片上只能涂抹一份痰标本，一张载玻片只能使用一次，不得清洗后再次用于痰涂片染色检查。

3、涂抹完毕后的痰标本，在检查结果报告前，应暂时保留。以备涂片、染色不合格影响镜检结果时，重新涂片和染色之用。

4、萋－尼氏染色油镜检查.

（三）实验室登记：按照年度病人序号和痰标本序号在实验室登记本上进行登记，并以同样的号码在痰涂片检查单上进行标记。检验单的病人姓名应与实验室登记本一致。

（四）痰涂片检查结果登记与报告：及时在登记本上登记痰涂片检查结果。当病人的三次痰涂片检查完成后，发现有阳性痰涂片，应在规定时间内报医院防保科，县级结核病防治机构再对痰涂片进行确认。

（六）痰涂片的保存：每个查痰点镜检后的全部痰涂片应按实验室登记本序号连续排列，分别存放在各点固定的玻片盒中，供上级实验室复核确认。

（七）痰检质量控制：每个痰涂片检查点均按照中国结核病防治规划《痰涂片镜检质量保证手册》的要求，作为一个独立的被质控单位接受室间质量评估和检查工作。

二、萋－尼氏染色

1、涂片自然干燥后，放置在染色架上，玻片间距保持在10 mm以上的距离；火焰固定(在5秒钟内将玻片置于火焰上来回烘烤4次)。

2、滴加石碳酸复红染液，盖满痰膜，火焰加热至出现蒸汽后，脱离火焰，保持染色5分钟。染色期间应始终保持痰膜被染色液覆盖，必要时可续加染色液。加温时勿使染色液沸腾。

3、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水。

4、自痰膜上端外缘滴加脱色剂布满痰膜，脱色1分钟；如有必要，需流水洗去脱色液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止。

5、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去脱色液，沥去玻片上剩余的水。

6、滴加亚甲蓝复染液，染色30秒钟。

7、流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去复染液，沥去标本上剩余的水。待玻片干燥后镜检。

一张染色合格的痰玻片，由于被亚甲蓝染色而呈亮蓝色。将染色后的玻片放置在报纸上，如果报纸上的文字透过痰膜不能被看清，表明该玻片涂抹过厚。